sigma离心机差速离心和密度梯度离心技术
1 差速离心
差速离心利用离心样本组分中不同沉降系数粒子的沉降速度差别(如各细胞组分),经一定速度、一定离心力及一定时间离心,先后沉降而得到分离。在此过程中样本往往被分离为沉淀物和上清液两部分。前提是待分离的两种或几种粒子的S值的差值足够大(至少差10倍以上)才能得到较好的分离，如果两种或几种粒子的S值相差很小,则难得到好的分离。关键要精确控制好分步离心的时间和速度,时间过长或转速过高会使不该沉降的颗粒也沉降下来,影响分离纯化效果。
2 密度梯度离心
密度梯度离心是样本在有密度梯度的惰性介质液中进行离心沉降或沉降平衡,即在一定离心力作用下把粒子分配到梯度液中相应的位置上,形成不同区带而得到分离(0。密度梯度离心又可分为:
(1)密度梯度沉降离心或称差速区带离心。用于分离粒子大小、形状各异(存在一定的S值差)而密度相近的样本。梯度液密度<样本组分密度,先将样本液加在梯度液液面上,在离心力作用下粒子各自以一定的速度沉降逐渐分离在离心容器中依沉降系数大小形成由下至上的区带。操作要领是需精确设定离心时间(各样本区带间拉开到最大距离后即停机),降速不能过快。
(2)等密度离心。待分离样本粒子在密度梯度液密度范围内,离心前加样其中呈均匀分布,在离心力的作用下,依不同粒子的浮力密度差,或向下沉降、或向上浮起,最终沿梯度移动到与它们恰好相等的密度梯度位置上(即等密度点)形成区带。离心效果取决于粒子的浮力密度差,差值越大分离效果越好,与粒子的大小、形状无关,但后两者涉及到平衡的速度、时间及区带的宽度。离心时间一般要长于差速区带离心。
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